[陈波洁]人无排卵功血子宫内膜上皮细胞生物学特性初步研究

　　王欣　 程湘　 成娅　 陈波洁　 刘萍　 王智　 林桂兰　 杨合荣　 王惠

　　摘　要：目的 探讨ADUB EEC的部分生物学特性.方法 采用电镜、MTT、磁酶免及免疫组化等方法了解ADUB EEC的超微结构、生长曲线、CA125分泌及PCNA、ER、PR表达情况，并与在体ADUB子宫内膜组织及培养的正常EEC进行比较.结果 体外培养的ADUB EEC基本保留了体内的结构特征，体外增生水平低，分泌异常.结论 原代培养的ADUB EEC为研究无排卵功血发病机制及治疗奠定了实验基础.

　　关键词：无排卵功血；子宫内膜；上皮细胞；原代培养

　　疾病的体外实验模型是研究其机制的重要手段，目前因无经济、方便的无排卵功血实验模型，致使其相关研究滞后。由于原代培养的细胞和组织刚刚离体，生物学特征未发生很大变化，最接近并能反映体内生长状态。因此，我们分离培养了无排卵性功能失调性子宫出血 子宫内膜上皮细胞 ，并在体外观察其部分生物学特性，以期为探讨无排卵功血的发生机制与防治研究提供有力的实验手段。

　　1材料与方法

　　1.1标本来源

　　留取2OD4年4一12月在本科室及西南医院妇产科接受诊断性刮宫术的月经过多30例患者的子宫内膜，排除了生殖系统器质性病变和全身血液系统疾病，为功血组；在本院妇科病房住院的月经正常、因其他疾病行子宫切除手术的患者22例，为正常组，经腹切除子宫后立即刮取内膜。患者年龄27一52岁。术前3个月内未用过激素治疗。所取的每例子宫内膜标本分为2份，一份以10%甲醛固定送病理，一份用于细胞培养。术后组织学证实功血组子宫内膜病理改变为增生期样子宫内膜16例，单纯性子宫内膜增生过长14例；正常组子宫内膜组织学类型为增殖期9例，分泌期13例。

　　1.2主要试剂及仪器

　　DMEM/F12培养基和胎牛血清 ；Ⅲ型胶原酶 ；鼠抗人ER单抗、鼠抗人PR单抗、鼠抗人PCNA单抗和免疫组化试剂盒(S-P法) ；MIT ；透射电镜 。

　　1.3方法

　　1.3.1 EEC的分离和原代培养 采用胶原酶梯度浓度消化、筛网分离、差速贴壁分离EEC，以含5%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养。

　　1.3.2透射电镜观察超微结构原代培养分离、纯化的EEC，3%戊二醛固定后常规方法制片.

　　1.3.3 MTT法测生长曲线将分离纯化的EEC以2xl04/ml的密度接种于96孔板培养，每个时间点设6个复孔，从接种后24 h开始，每隔24 h，每组复孔内加入5 mg/ml的MTT20ul，继续培养4 h，吸弃培养液，加入150ul DMSO(二甲基亚砜)，振荡10 min，在酶标仪上以490nm波长测定每孔吸光度D(490)，用只加培养液的空白对照孔调零。重复至第7天结束。以时间为横坐标、D(490)为纵坐标，绘制生长曲线。